傳代步驟：

棄去舊的生長(zhǎng)液-->用無(wú)鈣鎂水(CMF)沖洗貼壁細(xì)胞數(shù)次(視細(xì)胞瓶的大小,3--5次)-->剩少許CMF,滴入 ATV 2--3滴-->搖勻細(xì)胞瓶中的液體,使ATV均勻的分布到瓶里的沒個(gè)地方-->放入37度二氧化碳溫箱中3--5min消化-->棄去ATV,加入生長(zhǎng)液,拍打吸吹下細(xì)胞-->鏡下觀察-->分瓶-->作好記號(hào),放入37度二氧化碳溫箱生長(zhǎng)

細(xì)胞特點(diǎn):該細(xì)胞生長(zhǎng)力強(qiáng),而且快速一般24h就可以張到80%,48h不傳就會(huì)變的很老,所以該細(xì)胞傳時(shí)要勤點(diǎn);我感覺MDBK還是很好傳的,比以前我傳的ST、Vero細(xì)胞等要好傳一些，且不那么容易死亡，所以是我的一個(gè)比較好的選擇！該細(xì)胞適合接種皰疹病毒（如：偽狂犬病毒）！

BHK-21：棄除舊的培養(yǎng)液后---用緩沖液沖洗一遍----用0.22%的胰酶消化液消化約兩分鐘左右可以看到細(xì)胞像沙子一樣脫落-------趕緊倒掉胰酶加入含10%的牛血清培養(yǎng)液終止消化。但目前G內(nèi)能找到的BHK-21細(xì)胞大部分都有支原體感染，如果是好的BHK-21細(xì)胞能做到1比20的分種率。

補(bǔ)充一點(diǎn)關(guān)于BHK-21的培養(yǎng),先用少量胰酶沖洗一下,棄去,再用胰酶消化1min左右,效果會(huì)好一些

皮膚成纖維細(xì)胞和THP-1細(xì)胞：皮膚成纖維細(xì)胞是貼壁生長(zhǎng)的。THP-1細(xì)胞是懸浮的。

由于我們實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)間也不是很長(zhǎng)，所以也只能說(shuō)說(shuō)自己平時(shí)的操作了。

先說(shuō)皮膚成纖維細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞鋪滿瓶底，也就是細(xì)胞與細(xì)胞之間沒有間隙時(shí)，就可以傳代了。一般十天左右傳一代。先吸棄舊培養(yǎng)液，用D-Hanks液洗兩遍，再加入0.25%的胰酶，加入的量以能覆蓋瓶底為準(zhǔn)。加入后輕輕搖晃培養(yǎng)瓶使液體覆蓋瓶底，然后靜置兩分鐘左右，**好是能在顯微鏡下觀察，當(dāng)細(xì)胞之間出現(xiàn)間隙且有一部分細(xì)胞呈現(xiàn)圓形后即可。吸去胰酶，加入含血清培養(yǎng)液，搖晃瓶子使培養(yǎng)液覆蓋瓶底就行了。因?yàn)檠蹇梢越K止胰酶的消化。然后吹打瓶底各處使細(xì)胞脫落。再分瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液。

THP-1細(xì)胞的傳代就比較簡(jiǎn)單了。可以有兩種傳代方法。如果鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)很好，沒有其它雜質(zhì)即細(xì)胞裂解物之類的，就可以采用直接傳代法。傳代前將細(xì)胞培養(yǎng)瓶直立一個(gè)半小時(shí)使細(xì)胞自然下沉。吸棄上層少量培養(yǎng)液約三分之一，將余下的培養(yǎng)液分成兩瓶，再分別補(bǔ)加培養(yǎng)液即可。如果鏡下觀察覺得培養(yǎng)液中有雜質(zhì)即可采用離心傳代法。如果細(xì)胞數(shù)目較多可以低速離心約600轉(zhuǎn)離心六分鐘，細(xì)胞可以沉淀下來(lái)而且可以去除細(xì)胞碎片之類的雜質(zhì)。如果覺得細(xì)胞數(shù)目不多比較寶貴，那就提高轉(zhuǎn)速可以1000轉(zhuǎn)離心六分鐘，這樣細(xì)胞損失很少但可能也有些雜質(zhì)會(huì)一起沉淀下來(lái)。離心后去除上清液，加入新的培養(yǎng)液吹打渾勻即可分瓶傳代了。