全球生物標準協(xié)會（GBSI）進行的在線調(diào)查結(jié)果證實了許多細胞科學(xué)家已經(jīng)知道的情況。

超過一半的受訪者--52％ - “從未”對他們實驗中使用的細胞系進行認證或其他與物種相關(guān)的質(zhì)量控制測試。根據(jù)調(diào)查結(jié)果，百分之四十四的人從未進行過STR（短串聯(lián)重復(fù)）DNA分析，這是公認的認證標準。

雖然受訪者更有可能進行一些與無菌相關(guān)的微生物污染質(zhì)量控制，特別是目視檢查，但這些措施通常不會檢測到支原體細菌感染的細胞。

微生物污染和其他細胞類型的細胞和組織培養(yǎng)污染不僅影響所討論的培養(yǎng)物，而且還影響實驗結(jié)果的整體再現(xiàn)性。

隨著細胞培養(yǎng)物用于生物研究，疫苗生產(chǎn)和用于個性化醫(yī)療和新興再生醫(yī)學(xué)應(yīng)用的治療性蛋白質(zhì)的生產(chǎn)的持續(xù)增加，培養(yǎng)物污染仍然是一個重要的問題。根據(jù)過去十年對主要細胞庫的提交，估計有18％**36％的細胞系可能被污染或錯誤識別。

例如，在2008年，通過STR分析分析了40個人甲狀腺癌細胞系。僅獲得了23種獨特的特征，并且許多交叉污染細胞系不是甲狀腺。這些細胞系先前已在甲狀腺癌研究中使用了二十年。

由于這個問題的范圍，NIH和許多期刊現(xiàn)在在批準或接受出版之前建議或要求細胞系認證，這使得科學(xué)家利用細胞培養(yǎng)進行研究**關(guān)重要。

避免其他細胞類型的污染

一般考慮

• 一般保持良好的細胞培養(yǎng)實踐：幫助確保單細胞類型的維護在任何時候只處理生物安全罩中的單個細胞系。
• 在將其用于特定細胞系之間徹底清潔工作區(qū)。
• 將設(shè)備專用于單細胞系，包括瓶子和細胞培養(yǎng)基和其他試劑的等分試樣。
• 清楚地標記瓶子; 等分試樣也應(yīng)清楚標記，并且不得在細胞系之間共享。
• 定期清空廢物容器并使用有效對抗微生物和細胞培養(yǎng)物的消毒劑。

采取具體的預(yù)防措施

• 從信譽良好的細胞庫中獲取細胞系。
• 開發(fā)和維護主要和工作細胞庫的受控細胞庫系統(tǒng)。堅持這些慣例有助于避免污染，交叉污染，以及每次連續(xù)傳代培養(yǎng)都會增加的遺傳和表型不穩(wěn)定性。
• 執(zhí)行認證測試，包括STR分析，同工酶分析和污染測試。
• 避免細胞系轉(zhuǎn)移給同事。如果轉(zhuǎn)移確實發(fā)生，細胞應(yīng)附有驗證材料完整性的綜合文件。

從信譽良好的細胞庫中獲取細胞系，定期檢查細胞系的特征，并實施良好的無菌技術(shù)將有助于避免交叉污染。DNA指紋圖譜，核型分析和同種型分析可以確認細胞培養(yǎng)物中是否存在交叉污染。

連續(xù)監(jiān)測培養(yǎng)細胞

通過相差顯微鏡定期檢查細胞系形態(tài)和生長特征并與參考圖像比較可以指示早期問題。這些線索包括在從冷凍儲存中恢復(fù)后很快識別細胞系中的意外形態(tài)或生長特征，這可能意味著從儲存中回收錯誤的小瓶。包括正確格式的細胞系名稱的印刷標簽必須具有適合于低溫儲存的粘合劑，因為不適當(dāng)粘附的標簽將分離，在庫存中留下未標記的小瓶。

美G典型培養(yǎng)物保藏中心（ATCC）開發(fā)了一種人體細胞系認證標準，建議使用STR分析。可以在大多數(shù)可以執(zhí)行分子技術(shù)的實驗室中進行STR分析，從而為人類細胞系的鑒定提供簡單，低成本和可靠的方法。

需要結(jié)合常規(guī)身份測試和對良好細胞培養(yǎng)實踐的警惕，以提供有效的細胞培養(yǎng)并確保研究對于同行評審是可接受的。如果不遵守這些指導(dǎo)原則，將導(dǎo)致不良遺產(chǎn)和無效研究。

參考

1. Passim等人。使用未經(jīng)驗證的，過度傳遞的細胞系的成本：我們需要多少數(shù)據(jù)？生物學(xué)技術(shù)。2007年11月; 43（5）：575,577-8,581-2。

愛德華伯內(nèi)特博士，博士。James Cooper，細胞系交叉污染的檢測和預(yù)防：Biowire 2012春季，19-2.1

3. Shweppe等人：40個人類甲狀腺癌細胞系的脫氧核糖核酸分析顯示交叉污染導(dǎo)致細胞系冗余和錯誤識別。Journal of Clinical Endocrinology＆Metabolism，93卷，第11期，2008年11月1日，第4331-4341頁。

4.大師，JR等。短串聯(lián)重復(fù)分析為人細胞系提供了G際參考標準。Proc Natl Acid Sci US A. 2001年7月3日; 98（14）：8012-8017。

5. Freedman，LP等。改變細胞培養(yǎng)文化：應(yīng)用**佳實踐和認證以確保科學(xué)再現(xiàn)性。2015年10月1日.Bio Pharm International Volume 28，Issue 10，pages 14-21。